| 用途

 

    体内 Ran 激活水平的分析。

    检测增强 Ran 活性的化合物和蛋白质。

    检测抑制 Ran 活性的化合物和蛋白质。

    对细胞（组织）中的 Ran 活性进行定位、定性、定量研究。

 

 

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| 产品说明

 

     Ran 是Ras 家族的一员，是细胞中最丰富的小G蛋白。Ran 不象其它Ras蛋白分布于膜或胞浆，而是主要分布在核内，尽管Ran并不具有核定位信号。Ran与其他的 GTP 结合蛋白一样，在非活性 GDP 结合状态和活性 GTP 结合状态之间循环。效应蛋白与 GTP 结合优先于 Ran 的 GDP 结合状态，为 Ran在细胞中的功能提供了基础 .小分子单体G蛋白Ran具有鸟苷三磷酸酶活性，其结合形式Ran-GTP作为区分间期细胞的核质和胞质的一个分子的标记，并参与调控核质运输，指导纺锤体形成以及引导核膜解体与装配。因此分析与监测Ran的激活对研究 Ran-GTP的功能提供重要的依据，目前市面上尚无直接测定Ran-GTP 活性的方法。

     

     77779193永利的 Ran活性检测试剂盒主要是利用识别蛋白特异构象的 Ran-GTP 单克隆抗体特异性的去检测细胞提取物或者体外的（样品需要进行 GTPγS 活化处理）活性 Ran-GTP 的水平。简言之，特异性识别 Ran活化构象的鼠单克隆抗体可以特异性结合细胞裂解液中的 Ran-GTP 活性蛋白，然后利用Protein A/G 将抗原抗体的结合物吸附下来，再利用特异性识别 Ran 的兔多克隆抗体进行免疫印迹分析进行检测。每个试剂盒可以进行30次免疫亲和沉淀检测 ，同时试剂盒中的 Ran- GTP 单克隆抗体也可以通过免疫组化和免疫荧光实验对细胞和组织中Ran 的活性进行监测。

 

 

 

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| 检测原理

 

         77779193永利的 Ran 活性检测试剂盒主要是利用识别蛋白特异构象的 Ran-GTP 单克隆抗体特异性的去检测细胞提取物或者体外的（样品需要进行 GTPγS 活化处理）活性Ran-GTP的水平。简言之，特异性识别 Ran 活化构象的鼠单克隆抗体可以特异性结合细胞裂解液中的 Ran-GTP 活性蛋白，然后利用Protein A/G将抗原抗体的结合物吸附下来，再利用特异性识别 Ran 的兔多克隆抗体进行免疫印迹分析进行检测。

 

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| 试剂盒组份及储存

 

名称	货号	规格	储存温度
Anti-active Ran mouse Monoclonal antibody	Cat.#NL23016	1x35ul	-20℃
Protein A/G Agarose	Cat.#NL30301	1x600ul	4℃
5xAssay/ lysis Buffer	Cat.#NL30303	1x30ml	4℃
Anti-Ran Rabbit polyclonal antiboy	Cat.#NL24016	1x50ul	-20℃
100xGTP-rS	Cat.#NL30302	1x50ul	-80℃
100XGDP	Cat.#NL30304	1x50ul	-80℃
HRP-Goat anti-Rabbit IgG	Cat.#NL29002	1x50ul	-20℃

 

注意:使用前应将100xGTP-rs和100xGDP 分装成10管/5ul/每管，并立即放入 -80℃ 冻存，避免反复冻融。

 

试剂盒所需自备物品。

 

1.刺激和未刺激的细胞裂解物；

2. 蛋白酶抑制剂；

3. 4 °C 摇杆或者摇床；

4. 0.5 M EDTA (pH 8.0)；

5. 1 M MgCl2；

6. 2X reducing SDS-PAGE sample buffer；

7. 电泳和免疫印迹相关试剂；

8. 免疫印迹缓冲液 TBST (10 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 M NaCl, 0.05% Tween-20)；

9. 免疫印迹封闭缓冲液 (TBST containing 5% 脱脂奶粉 or 3% BSA)；

10 ECL 检测试剂；

 

试剂盒注意事项

 

1.收到试剂盒后如不立即使用，请将试剂盒组分按照标签说明存储在相应的温度，100xGTP-rs和100xGDP 分装成10管/5ul/每管，并立即放入 -80℃ 冻存，避免反复冻融。 

2.Protein A/G Agarose使用前请稍微离心甩一下，因管壁上可能残留，而且是用20%乙醇保存的，如果乙醇挥发，体积较少时很难将Agarose吹散，所以请补充20%乙醇等于Agarose的体积。

3.使用50% 的Protein A/G Agarose前先用枪将其吹匀，一个反应管使用20 ul的50% 的Protein A/G Agarose足够。

4. 将50% 的Protein A/G Agarose加入反应管前先用1×Assay/Lysis Buffer洗涤3遍，以去除其中的乙醇，最后一遍用合适体积的1×Assay/Lysis Buffer悬浮Agarose，再分装于 反应管，保证每管参与反应的50% 的Protein A/G Agarose有20 ul。

5. 为了减少50% 的Protein A/G Agarose的损失，可以先在反应管中加入适当体积的1×Assay/Lysis Buffer。

6. 反应管中试剂加入顺序建议，先1×Assay/Lysis Buffer，然后是用Buffer稀释的Protein A/G Agarose，细胞裂解液和活性抗体，总体积建议0.5ml-1ml

7. 活性抗体的加入量请适当做调整，如可以加入0.5ug、1ug或者2ug。

8. 孵育反应在4℃ 360度摇床进行。<