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Rat (ADH) ELISA KIT (大鼠抗利尿激素)

品牌:NEWLF   
价格:1600/2200
规格:48T/96T
货号:NLR631

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Rat (ADH) ELISA KIT (大鼠抗利尿激素)

品牌:NEWLF   
价格:1600/2200
规格:48T/96T
货号:NLR631
应用:双抗夹心

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  • 用途

     

       本试剂盒用于测定大鼠血清血浆及相关液体样本中抗利尿激素(ADH)含量。   

     


     

    实验原理

     

          本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠抗利尿激素(ADH)水平。用纯化的大鼠抗利尿激素(ADH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入抗利尿激素(ADH),再与 HRP 标记的抗利尿激素(ADH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗利尿激素(ADH)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠抗利尿激素(ADH)浓度。

     

     


     

    基本性能

     

             

            性能

    灵敏度

     

    0.05ng/L 

     

    检测范围

     

    0.2ng/L -9 ng/L

     

    特异性

     

    可检测大鼠样本中抗利尿激素(ADH)含量其他类似物无明显交叉反应。

     

    重复性

     

    板内,板间变异系数均《10%

     

     


     

    试剂盒组份及储存

     

     

                中文名称

    规格

    开封后保存条件

    ELISA 酶标板

     

    96T :  8 孔×12 条

    48T :  8 孔×6 条

    2-8℃ 90天

    标准品

     

    96T :  0.5ml x1   (16ng/L)

    48T 0.25mlx1

    2-8℃ 90天

    HRP标记抗体

     

    96T :  6mlx1

    48T 3mlx1

    2-8℃ 90天

    样品稀释液

     

    96T :  1.5mlx1

    48T 1mlx1

    2-8℃ 180天

    标准品稀释液

     

    96T :  6mlx1

    48T :  3mlx1

    2-8℃ 180天

    显色剂A

     

    96T :  6mlx1

    48T :  3mlx1

    2-8℃(避光)  180天

    显色剂B

     

    96T :  6mlx1

    48T  3mlx1

    2-8℃(避光)  180天

    终止液

     

    96T :   6mlx1

    48T :  3mlx1

    2-8℃ 180天   180天

    30倍浓缩洗涤液

     

    96T :  20mlx1

    48T 10mlx1

    2-8℃ 180天   180天

    说明书

    1份

     

    质检报告

    1份

     

    密封袋

    1个

     

     

    说明;未拆封的试剂盒可以在2-8℃ 保存六个月.

     

     

    试剂盒所需自备物品。

     

     1.酶标仪(450nm波长滤光片) 

     2.高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 

     3.37℃恒温箱 

     4. 双蒸水或去离子水 

     5. 吸水纸 

     6. 加样槽

     

    样品收集方法(具体处理方法请咨询

     

    1.  血清:用无菌管收集,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右  (2000-3000转/分)仔细收集上清,保存过程中  如出现沉淀,应再次离心。

    2.  血浆:应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成应该再次离心。

    3.  尿液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

    4. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将剪碎的组织与 对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9 mL的PBS,具体体积可根据实验需要适 当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步 裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g 离心5-10分钟取 上清检测。

    5.  细胞提取液:贴壁 细胞用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5分钟后收集细胞。悬浮 细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS 中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃,1500×g离心10分钟,取上清检测。

    6. 细胞培养上清或其他生物体液;收集液体后于2-8℃,1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片,取上清检测。

     


     

    试剂盒注意事项

     

    1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 

    2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 

    3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 

    4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品 稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(n×5) 

    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 

    6. 底物请避光保存。 

    7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 

    8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 

    9. 本试剂不同批号组分不得混用。

     

    |  样本收集注意事项

     

    1. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    2. 标本采集后尽快进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

    3. 我们罗列的是通用的样本处理方法,无法涵盖各种样本,对于一些特殊样本,建议实验人员多参考已发表的文献,自行设计合理的样本 处理方法。

     

     

    |  检测前准备工作

     

    1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,以平衡至室温。

    2. 用双蒸水将30×浓缩洗涤液稀释成1×工作液。未用完的放回4 ℃。

    3. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

     

       

     

    8ng/L

     

    5号标准品

     

    150μl 原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

     

    4ng/L 

     

     

    4号标准品

     

    150μl 的5号标准品加入150μl 标准品稀释液

     

    2ng/L

     

     

    3号标准品

     

    150μl 的4号标准品加入150μl 标准品稀释液

     

    1ng/L

     

     

    2号标准品

     

    150μl 3标准品加入150μl 标准品稀释液

     

    0.5ng/L

     

    1号标准品

     

    150μl 的2号标准品加入150μl 标准品稀释液

     

    |  操作步骤

     

    1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、  待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加 样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液. 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底 )部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 

    2. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。  

    3. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此  重复 5 次,拍干。 

    4. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。 

    5. 温育:操作同 2 

    6. 洗涤:操作同 3 

    7. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟. 

    8. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 

    9. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终 止液后15分钟以内进行。 

      

    |  操作一览表  

     

                                           

     

     

      

    |  结果判断

     

     1. 每个标准品和标本的OD 值应减去空白孔的OD值。

     2. 以标准品的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,利用计算机软件采用直线回归的拟合方法创建标准曲线方程,通过样本的吸光度(OD值),利用方程计算样品的浓度值。

     3. 若样本的OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。

     

     

     |  示例曲线

     

     由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。详情请看质检报告.

     

     

      

       

     

     

     

     

     

     

     

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